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DAPI细胞染色液(DAPI Staining Solution)是适用于常见细胞和组织细胞核染色的染色液。DAPI,即2-(4-Amidinophenyl)-6-indolecarbamidine dihydrochloride,也称DAPI dihydrochloride,分子式为C16H15N5 · 2HCl ,分子量为350.25。可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光,灵敏度高于EB。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。DAPI的最大激发波长为340nm,最大发射波长为488nm,DAPI和双链DNA结合后,最大激发波长为364nm,最大发射波长为454nm。本DAPI染色液可以直接用于固定细胞或组织的细胞核染色,亦可以按照具体实验要求,稀释到相应浓度后进行染色。一般推荐工作浓度为0.5ug~10ug/ml。
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OGD模型即糖氧剥夺(OGD)离体脑缺血模型
糖氧剥夺(Oxygen and glucose deprivation,OGD)模型:
此法可模拟在体脑缺血模型,又称离体缺血模型。
我们拥有美国公司生产的三气培养箱,通过直接通入N2的方式精确控制培养箱内CO2和O2浓度,同时剥夺神经元培养基中的糖,从而造成培养神经元缺氧缺糖的环境,模拟在体脑缺血的情况。
实验如下
目的 :探讨一种简便、稳定、可重复的大鼠成年神经干细胞体外氧糖剥夺/复氧模型的制备方法 。
方法 :以来自于成年Fisher344大鼠的海马神经干细胞系为研究对象,以无血清培养基培养并传代,并用nestin和DAPI免疫荧光双染确认其生物学特性。
将三气培养箱氧气浓度调至1%以制备缺氧环境,将培养基换为不含葡萄糖的Earle′s平衡盐溶液,分别缺氧缺糖2h、4h、6h、8h、10h后取出细胞。
恢复正常条件继续培养24 h后倒置显微镜下观察细胞形态学变化,CCK-8比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率。同时设置常氧常糖的正常对照组。
结果 :与正常对照组相比,缺氧缺糖2h组细胞吸光度值明显升高,细胞存活率有一定的增长,但差异无统计学意义(P>0.05)。
随着缺氧缺糖时间延长,神经干细胞形态学损伤逐渐加重,细胞吸光度值逐渐下降,缺氧缺糖6h后与正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。
缺氧缺糖6h起细胞存活率均较正常对照组明显下降,比较差异有统计学意义(P<0.05);神经干细胞凋亡率逐渐增高,且均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),其中缺氧缺糖6h时细胞的凋亡率已超过50%。
结论 :利用三气培养箱物理缺氧方法 可成功建立一种简便、有效的神经干细胞体外氧糖剥夺/复氧模型。
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